如图是利用转基因技术培育抗病小麦的过程。请据图回答问题：
(1)重组质粒T除含有目的基因外，还必须有________、________和________等。
(2)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____________________________。
(3)在步骤⑤⑥中都需用________处理。为了确认目的基因通过⑦导入植物细胞后是否转录，通常采用______________法进行检测；验证目的基因导入受体细胞后是否成功表达，通常采用______________法从分子水平进行检测。
(4)假设该抗病基因D，通过基因工程导入小麦后连接到小麦的一条染色体上，则该小麦进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。
【答案】启动子 终止子 标记基因 获取大量重组质粒(让目的基因扩增) Ca2＋ 分子杂交 抗原—抗体杂交 2
【解析】1、基因表达载体的构建是基因工程的核心，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。
2、农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。
（1）将目的基因和质粒重组成重组质粒的过程是基因表达载体的构建，基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。故重组质粒T除含有目的基因外，还必须有启动子、终止子、标记基因。
（2）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是获取大量重组质粒(让目的基因扩增)。
（3）在步骤⑤⑥都需要将重组质粒导入细胞内，故都需用Ca2＋处理，使细胞处于感受态。检测目的基因在植物细胞内是否转录，根据转录的产物RNA与DNA中的模板链成碱基互补配对的原则，采用分子杂交法进行检测；验证目的基因导入受体细胞后是否成功表达，通常采用抗原—抗体杂交法从分子水平进行检测。
（4）假设该抗病基因D，通过基因工程导入小麦后连接到小麦的一条染色体上，经过减数分裂第一次间期DNA复制，每条染色体上含有两个染色单体，故在减数第一次分裂前期同源染色体联会时有2个D基因。