为获得高效降低胆固醇的乳酸菌，科研人员做了如下实验。
(1)取适量发酵酸肉，剪碎并研磨，磨碎后加入______制成1:10稀释液，再梯度稀释为10-6倍稀释液，涂布于因添加了CaCO3而不透明的乳酸菌培养基(MRS培养基)平板上，乳酸菌产生的乳酸能溶解CaCO3，在_______(填“有氧”或“无氧”)条件下恒温静置培养48小时。挑取具有______的菌落，用_______法接种在MRS培养基上纯化。可通过观察菌落的_____判断是否达到了纯化。
(2)纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后离心测定______中胆固醇的含量，以______作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。
【答案】无菌水 无氧 溶钙圈(或“透明圈”) 划线 形态、大小等特征 上清液 未接种的高胆固醇培养液
【解析】1、筛选与分离微生物常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。观察菌落特征可以区分不同的微生物。
2、微生物常见的接种方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板、接种、划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
（1）根据题意可知，需要将取出的含有乳酸菌的菌株剪碎并研磨，磨碎后加入无菌水制成1：10稀释液，再梯度稀释到10-6的稀释液，涂布于添加了CaCO3的乳酸细菌培养基（MRS培养基）平板上，由于乳酸菌是厌氧微生物，所以需要在无氧条件下恒温静置培养48小时。挑取具有溶钙圈（或“透明圈）的菌落，用平板划线法接种在MRS培养基上纯化。可通过观察菌落的形态、大小来判断是否达到了纯化。
（2）胆固醇属于脂质，密度较小，存在于上清液中，所以纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后离心测定上清液中胆固醇的含量，以未接种的高胆固醇培养液作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。