蛋白质分子的大小、形状、结构不同,所带电荷的性质和多少不同,以及在盐溶液中溶解度不同,可以利用以上的不同对不同种类的蛋白质进行分离纯化,请回答以下问题:
(1)分子大小:对于分子大小方面有一定差别的蛋白质可采用密度梯度离心、________、________等方法将它们分开。
(2)形状:对两种相同质量的蛋白质而言,________形蛋白质具有较小的有效半径,在通过膜、凝胶过滤或电泳凝胶中的小孔运动时,遇到的摩擦力小,从而也能达到分离蛋白质的目的。
(3)溶解度:蛋白质具有盐溶和________现象,根据蛋白质在不同浓度的盐溶液中________不同,通过控制____________可分离析出蛋白质;蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度有很大不同,从基本不溶(<10 μg/mL)直至极易溶解(>300 μg/mL)不等,故可分离蛋白质。
(4)电荷:蛋白质净电荷取决于________________________,利用待分离样品中各种分子带电性质,可用________的方法将其分离;或者改变蛋白质混合物溶液中的盐离子浓度、pH和(阴、阳)离子交换填料,不同蛋白质对不同的离子交换填料的吸附容量不同,蛋白质因________________________________而分离。
(5)稳定性:多数蛋白质加热到94 ℃时会因变性而沉淀,利用这一性质,可容易地将一种经这样加热后________________________的蛋白质从大部分其他蛋白质中分离开;也可用蛋白酶处理上清液,消化杂蛋白,留下某些________________的蛋白质。
【答案】透析 电泳 球 盐析 溶解度 盐浓度 氨基酸残基所带的正负电荷的总和 电泳 吸附容量不同或不被吸附 仍具有活性的可溶性 抗蛋白酶
【解析】蛋白质的提取与分离的原理是根据蛋白质的理化性质,即:蛋白质的形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等的千差万别,由此提取和分离各种蛋白质。胶色谱法的原理:分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,路程长,流动慢。蛋白质的提取与分离的步骤为:(1)样品处理:①红细胞的洗涤,②血红蛋白的释放;(2)粗分离:①分离血红蛋白溶液,②透析;(3)纯化:调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质;(4)纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
(1)对于分子大小方面有一定差别的蛋白质可采用密度梯度离心、透析、电泳等方法将它们分开。
(2)对两种相同质量的蛋白质而言,球形蛋白质具有较小的有效半径,在通过膜、凝胶过滤或电泳凝胶中的小孔运动时,遇到的摩擦力小,从而也能达到分离蛋白质的目的。
(3)蛋白质具有盐溶和盐析现象,根据蛋白质在不同浓度的盐溶液中溶解度不同,通过控制盐浓度可分离析出蛋白质。
(4)蛋白质的净电荷取决于氨基酸残基所带的正负电荷的总和,利用待分离样品中各种分子带电性质,可用电泳的方法将其分离;或者改变蛋白质混合物溶液中的盐离子浓度、pH和(阴、阳)离子交换填料,不同蛋白质对不同的离子交换填料的吸附容量不同,蛋白质因吸附容量不同或不被吸附而分离。
(5)高温会使得大多数蛋白质变性,所以利用高温将仍具有活性的可溶性的蛋白质与其他蛋白质分离开来;蛋白酶可以将蛋白质水解,某些抗蛋白酶的蛋白质则包被水解而分离出来。